（一）雪旺細(xì)胞

       雪旺細(xì)胞（Schwann cell，SC）是外周神經(jīng)系統(tǒng)最主要的膠質(zhì)細(xì)胞，也是外周神經(jīng)的成髓鞘細(xì)胞；它形成髓鞘，或包裹軸突而不形成髓鞘。雪旺細(xì)胞的功能極其活躍，一旦神經(jīng)受損，它能反應(yīng)性分裂增殖，分泌神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，產(chǎn)生細(xì)胞外基質(zhì)和細(xì)胞粘附分子，對(duì)神經(jīng)元及其軸突起營(yíng)養(yǎng)和修復(fù)作用。近年來(lái)的研究表明，雪旺細(xì)胞也能促進(jìn)中樞神經(jīng)對(duì)脫髓鞘損傷的修復(fù)，如對(duì)脊髓的再生，對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)以及對(duì)隔-海馬通路再生等。

       1、材料和方法

       雪旺細(xì)胞培養(yǎng)取材于各類(lèi)哺乳動(dòng)物的外周神經(jīng)和背根神經(jīng)節(jié)，取孵化8-12d雞胚、出生1-3d 的小鼠或大鼠和人工流產(chǎn)的人胎兒，在無(wú)菌條件下用解剖鑷分離出神經(jīng)節(jié)，剝除神經(jīng)節(jié)被膜, 用0.125%胰蛋白酶消化(37℃ 30min)后用培養(yǎng)液（ 90% DMEM，10 % 胎牛血清，2mM谷氨酰胺）吹打分散成細(xì)胞懸液，先接種于玻璃培養(yǎng)瓶中，于二氧化碳培養(yǎng)箱中孵育30 min后，翻轉(zhuǎn)瓶子吸出細(xì)胞懸液，除去已貼壁的成纖維細(xì)胞，再接種于涂有鼠尾膠的35mm塑料培養(yǎng)皿中，種植密度為0.2×105個(gè)細(xì)胞/ml，每皿2ml細(xì)胞懸液置。置二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。接種第3 d，在培養(yǎng)皿中分別加入細(xì)胞分裂抑制劑5-氟-2'-脫氧尿苷15μg/ml和尿苷35μg/ml，以進(jìn)一步去除成纖維細(xì)胞，作用48小時(shí)后更換新鮮培養(yǎng)液，以后每周換液兩次，每次更換一半新鮮飼養(yǎng)培養(yǎng)液。

       2、雪旺細(xì)胞的生長(zhǎng)和形態(tài)特征

       培養(yǎng)15d后可獲得較高純度的雪旺細(xì)胞，雪旺細(xì)胞呈雙極梭狀，核卵居中，相互平行排列，經(jīng)S-100免疫組織化學(xué)染色呈陽(yáng)性反應(yīng)。增殖分裂的雪旺細(xì)胞可用于進(jìn)一步傳代培養(yǎng)，也可進(jìn)行冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

     （二）星形膠質(zhì)細(xì)胞

       星形膠質(zhì)細(xì)胞是膠質(zhì)細(xì)胞中體積最大，數(shù)量最多的一種，胞體呈星形，核大，呈卵圓形，染色質(zhì)稀少，星形膠質(zhì)細(xì)胞分兩類(lèi)，一類(lèi)為原漿性星形膠質(zhì)細(xì)胞（protoplasmic astrocyte），其突起短粗，分枝多。另一種為纖維性星形膠質(zhì)細(xì)胞（fibrous astrocyte），它的突起細(xì)長(zhǎng)，分枝少。纖維性星形膠質(zhì)細(xì)胞是與少突膠質(zhì)細(xì)胞源自同一前體細(xì)胞。星形膠質(zhì)細(xì)胞具有多種功能，中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)神經(jīng)元及其突起間的空隙幾乎全部由星形膠質(zhì)細(xì)胞充填，起結(jié)構(gòu)的支持作用，星形膠質(zhì)細(xì)胞的突起構(gòu)成血腦屏障，星形膠質(zhì)細(xì)胞能攝取和代謝某些神經(jīng)遞質(zhì)如γ-氨基丁酸等。

     （1）方法和結(jié)果

       選擇出生 2 d 的SD大鼠，無(wú)菌條件下分離出大腦皮層，用0.125%胰蛋白酶消化(37℃ 30min)后用培養(yǎng)液（ 90% DMEM，10 % 胎牛血清，2mM谷氨酰胺）吹打分散成細(xì)胞懸液，先接種于玻璃培養(yǎng)瓶中，于二氧化碳培養(yǎng)箱中孵育30 min后，翻轉(zhuǎn)瓶子吸出細(xì)胞懸液，除去已貼壁的成纖維細(xì)胞，再接種于涂有鼠尾膠的75cm2塑料培養(yǎng)瓶中, 種植密度為1×105 個(gè)細(xì)胞/cm2，每瓶10ml細(xì)胞懸液置。置二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每周換液2 次，培養(yǎng)10-14h，細(xì)胞分為兩層，下一層為I型膠質(zhì)細(xì)胞即原漿形膠質(zhì)細(xì)胞，上一層是O-2A前體細(xì)胞，根據(jù)兩類(lèi)細(xì)胞貼壁能力的差異，以振蕩培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行分選，在37℃搖床上振蕩，16 h（180r/min）O-2A前體細(xì)胞可被搖下來(lái)，搖下來(lái)的細(xì)胞種植在涂有鼠尾膠的75mcm2塑料培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)液使用20 % 胎牛血清促進(jìn)O-2A前體細(xì)胞分化為II型膠質(zhì)細(xì)胞即纖維型膠質(zhì)細(xì)胞?？煞至言鲋车脑瓭{形膠質(zhì)細(xì)胞和纖維型膠質(zhì)細(xì)胞可用于進(jìn)一步傳代培養(yǎng)，也可進(jìn)行冷凍保存?zhèn)溆?。純度鑒定可用膠質(zhì)纖維酸性蛋白抗體（GFAP）染色確定。

       如需了解更多相關(guān)技術(shù)知識(shí)，歡迎聯(lián)系上海喆圖科學(xué)儀器有限公司。